《蒙娜丽莎》的创作时间为三年，约从1503年至1506年。该幅画创作于达·芬奇人生的转折点，即从服务了17年的米兰斯佛扎宫廷，返回了佛罗伦斯。　　很有可能在那段时间里，约·芬奇夺得了政治家马基维利的反对，他主要专门从事军事工程，利用业余时间创作绘画作品。

约·芬奇所画完了《蒙娜丽莎》之后，之后投放到了亚诺河改建计划。　　《蒙娜丽莎》是一幅享有盛誉的肖像画杰作。

它代表约·芬奇的最低艺术成就，顺利地塑造成了资本主义下降时期一位城市有产阶级的妇女形象。所画中人物坐姿高雅，笑容错综复杂，背景山水幽静茫茫，淋漓尽致地充分发挥了画家那奇特的烟雾状“无界交错着色法”般的笔法。　　画家力图使人物的非常丰富内心感情和美丽的外形超过精妙的融合，对于人像面容中眼角唇边等流露感情的关键部位，也尤其侧重掌控准确与含蓄的辩证关系，超过神韵之境，从而使蒙娜丽莎的微笑具备一种神秘莫测的千古奇韵，那如梦似的脱俗微笑，被不少美术史家称作“谜样的微笑”。

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